江苏省仪征中学
 
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来源:高三生物备课组  时间:2020-11-13
 

1、长度:15-30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。

2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5-10度。引物长度小于20时,其Tm恒等于4×(G十C)十2×(A十T)。

3、碱基分布的随机性:应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3"端出现超过3个的连续G或C,否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。

4、引物自身:不能含有自身互补序列,否则会形成发夹样二级结构

5、引物之间:两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3"端的互补重叠。

6、上下游引物的互补性:一个引物的3"末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。

7、3"末端:如果可能的话,每个引物的3"末端碱基应为G或C。

8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。

 
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